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細胞復(fù)蘇注意事項

點擊次數(shù):1694 更新時間:2017-05-08

注意事項:

1、注意無菌操作

2、細胞復(fù)蘇時融化凍存細胞速度要快,防止細胞損傷,細胞復(fù)蘇后的操作在適宜溫度中進行,減少冷凍保護劑對細胞的毒性。

3、為了避免復(fù)蘇過程中細胞液中有冰晶的出現(xiàn),破壞細胞膜及細胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)。從液氮拿出來,要快速丟入37度水浴,等細胞液剛剛化完取出,加培養(yǎng)液稀釋。

4、細胞放入水浴中注意用鑷子夾住細胞凍存管并在水浴中不時晃動,使其受熱均勻,并防止水浴時水進入細胞凍存管污染細胞。打開細胞凍存管之前要用酒精棉球?qū)龃婀芟静⒘栏伞?/p>

5、液氮一定的危險性,打開液氮罐取出細胞時,要注意防凍,戴防凍手套,防護眼睛。

6、如果凍存管密封不嚴,液氮可被吸入。由于解凍時凍存管中的氣溫急劇上升,將可能發(fā)生爆炸。復(fù)蘇過程中應(yīng)蓋上恒溫水浴鍋的蓋。

細胞復(fù)蘇后貼壁細胞較少的原因:

1、凍存細胞時消化時間過長,導(dǎo)致細胞復(fù)蘇時失去鐵壁能力。

2、細胞凍存液的質(zhì)量不好也會導(dǎo)致細胞死亡。

3、凍存液的量加的太多也不好。

4、凍存的時候把DMSO混均勻,會有一些影響,但不會太大。

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